斑节对虾杆状病毒(MBV)核酸检测试剂盒(PCR法)

通用名称： 斑节对虾杆状病毒(MBV)核酸检测试剂盒

Name  ： Diagnostic Kit for  Monodon BacμLovirus DNA

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测从对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品等标本中分离出的斑节对虾杆状病毒DNA，用于斑节对虾杆状病毒的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对斑节对虾杆状病毒特异性引物，对斑节对虾杆状病毒DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。

【所需仪器】

PCR仪、电泳仪、紫外凝胶成像仪等

【标本采集】

对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品0.1g左右，其中，对虾幼体、仔虾取完整个体，3cm以下的幼虾取摘除虾眼的头胸部，较大的幼虾可取腮区或数根腮丝，成虾取1~2根腮丝或自心脏或腹部血窦抽取血淋巴，怀疑为慢性感染的较大幼虾或成虾取淋巴器官。如果2h以后才能处理，宜将样本保存于无水乙醇中。非对虾的甲壳类动物参照对虾的方法取样。非生物样品，取0.1~0.5g。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

1）样本前处理

手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中

2）DNA提取

对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液（固体标本加入50μL核酸提取液），100℃恒温处理10分钟，13,000 rpm离心5分钟，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；

DNA的提取也可以采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

3.加样（样本处理区）

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR扩增（核酸扩增区）

将待检测反应管置于PCR仪反应槽内；

推荐循环参数设置：

反应体系为25μL；

5.电泳检测

1) 2%琼脂糖凝胶配制：稀释50×TAE缓冲液至1×TAE (取20mL 50×TAE缓冲液，加980mL双蒸水至1L)，称4g琼脂糖放于500mL 锥形瓶中，1×TAE 缓冲液200 mL，置入微波炉中加热熔解(避免加热沸腾溶液外溢)，再加入10μL 染料充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后使用；

2) 电泳：在电泳槽中加入1×TAE缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。用移液器取10μL PCR 扩增产物于琼脂糖凝胶孔中。加样后，以5V/cm 电压，电泳20-30min（每次电泳时，每隔10min观察一次。当加样缓冲液中溴酚蓝电泳过半至凝胶下2/5处时，可停止电泳）。电泳后，紫外灯下观察结果。

6.结果判定

阳性质控品出现150bp条带，阴性质控品不出现条带或只出现片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。被检样品出现150bp条带，判断为阳性，否则为阴性。

7.产品性能指标

试剂灵敏性10-3以上，特异性100%，批间批内差异≤3%。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【生产企业】  

企业名称：广州维伯鑫生物科技有限公司

邮 编：510663

生产地址：广州市高新技术产业开发区科学城科丰路31号G11栋2层

电子邮箱：info@vipotion.com

电 话：020-66377266

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